PROGRAMACION DE LABORATORIOS DE BIOQUIMCA UDELAS

UNIVERSIDAD ESPECIALIZADA DE LAS AMERICAS.
FORMULARIO DEL PLAN PROGRÁMATICO LABORATORIOS DE BIOQUIMICA PARA FISIOTERAPIA
(3)




ASIGNATURA BIOQUÍMICA
CURSO TEÓRICO-PRÁCTICO
PARTE TEÓRICA 32 HORAS
PARTE PRÁCTICA 32 HORAS
CREDITO 4
TIEMPO 4 HORAS SEMANALES




Experimento # 1
GLUCIDOS

Objetivos

realizar pruebas generales, específicas y de caracterización de los glúcidos.
estudiar algunas propiedades químicas y físicas de los glúcidos
reconocer los grupos químicos responsables de las reacciones características de los glúcidos
familiarizar al estudiante con algunas funciones estructurales y metabólicas de los glúcidos

Materiales y reactivos

Dulzor relativo y prueba de solubilidad para diferentes glúcidos
· Monosacáridos: glucosa, fructosa
· Disacáridos: sucrosa, lactosa
· Polisacáridos: almidón, celulosa (algodón)

Reacción de molisch, prueba general para los glúcidos
· Solución de α-naftol al 5% en el alcohol etílico
· Acido sulfúrico concentrado
· Soluciones de glucosa, sucrosa y almidón al 0.5 %

Reacción de benedict
· Reactivo de benedict
· Soluciones de glucosa, sucrosa y almidón al 0.5%

Reacción de fehling
· Solución de Fehling A
· Solución de Fehling B
· Solución de Fehling C
· Soluciones de glucosa, sucrosa y almidón al 0.5 %

Reacción de acido pícrico
· Solución saturada de acido pícrico
· Solución de carbonato de sodio al 10 %
· Soluciones de glucosa, sucrosa y almidón al 0.5 %

Reacción de seliwanof, una reacción para cetosas
· Reactivo de seliwanoff
· Soluciones de glucosa, sucrosa y fructosa al 0.5 %

Reacción de barfoed, una prueba para diferenciar monosacáridos de disacáridos
· Reactivo de barfoed
· Soluciones de glucosa, sucrosa, maltosa y lactosa al 0.1 M

Reacción de Beal o prueba de orcinol, una prueba para pentosas
· Reactivo de Beal
· Soluciones de glucosa, arabinosa y ribosa al 0.5 %
Hidrólisis de sacarosa y del almidón
· Solución de sacarosa al 2%
· Solución de almidón al 1 %
· Acido clorhídrico concentrado
· Solución de hidróxido de sodio 1N

Reacción de yodo con diferentes polisacáridos
· Solución de almidón 1%
· Solución de glucógeno al 1%
· Solución de doctrinas al 1%
· Algodón
· solución de yodo

diálisis
· solución de glucosa al 5%
· solución de almidón al 1%
· bolsa de celofán o membrana dializadora
· hilo

fermentación
· solución de glucosa al 5%
· suspensión de levadura activa

reacción de fenilhidrazina.
· solución de fenilhidrazina
· solución de acetato de sodio
· reactivo de fenilhidrazina
· soluciones de glucosa, maltosa, lactosa y galactosa al 1 %


ESPERIMENTO 2
ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS GRASAS Y ACEITES
OBJETIVOS:
1. Identificar los componentes estructurales de los triglicéridos.
2. Realizar algunas pruebas de caracterización de las grasas y aceites.
3. Estudiar algunas propiedades de los jabones.
MATERIALES Y REACTIVOS:
a. Grasas y aceites (mantequilla, aceite, manteca, etc.).
b. Solventes orgánicos: Alcohol 95%, cloroformo, éter dietílico y tetracloruro de carbono.

Experimento 3

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DEL COLESTEROL Y DE ALGUNOS LÍPIDOS COMPLEJOS

OBJETIVOS:
1. Aislar el colesterol y algunos lípidos complejos de un tejido animal.
2. Ensayar pruebas de identificación del colesterol.
3. Identificar algunos de los constituyentes de los lípidos complejos.
4. Estudiar las propiedades de algunos lípidos complejos y de sus constituyentes.


Materiales y Reactivos:

A. Aislamiento
· Sesos de res o de cerdo
· Cetona
· Etanol al 95%
· Éter dietílico anhidro

· Mortero
· Licuadora
· Embudo de Buchner
· Papel filtro
· Vaso químico de 250 mL
· Plancha

B. Pruebas para el colesterol
· Solución clorofórmica del colesterol aislado
· Solución de colesterol R.A al 1% en cloroformo
· Cloroformo anhidro
· Ácido sulfúrico concentrado
· Anhídrido acético
· Tubos de ensayo



C. Prueba para fosfato
· Lecitinas y cefalinas aisladas en la prueba A
· Esfingomielinas aisladas en la prueba A
· Solución de molibdato de amonio
· Ácido nítrico concentrado
· Capsula de porcelana
· Embudo


D. Poder emulsionante de las lecitinas
· Lecitinas aisladas en la prueba A
· Aceite vegetal
· Tubos de ensayo


E. Pruebas para glúcidos

· Glucósidos de la esfingosina aislados en la prueba A
· Solución alcohólica de alfa-naftol al 5%
· Ácido sulfúrico concentrado
· Solución de ácido clorhídrico 6 N
· Carbonato de sodio
· Reactivo de Benedict
· Tubos de ensayo
· Papel tornasol



Laboratorio de Bioquímica Humana No. 4
Algunas Reacciones Cualitativas de las Proteínas

Objetivos
Ö Identificar algunos elementos presentes en las proteínas.
Ö Reconocer algunos grupos orgánicos que participan en la estructura de las proteínas.
Ö Determinar, mediante pruebas especificas, la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.
Ö Familiarizar al estudiante con algunas funciones estructurales y metabólicas de las proteínas.

Materiales
A. Determinación de Nitrógeno, Azufre y Fósforo
Sodio metálico (Cubitos de aproximadamente 3 mm de lado).
Caseína
Etanol
Solución de hidróxido de sodio al 10%
Solución de sulfato ferroso al 5%
Solución de ácido sulfúrico al 20%
Solución de cloruro férrico al 5%
Solución de ácido nítrico de 6 N
Solución de molibdato de amonio

B. Prueba Para el Grupo Amida, Reacción de Biuret
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Solución de hidróxido de sodio al 15%
Solución de sulfato de cobre al 1%

C. Prueba Para el Grupo ∞ Amino Libre, Reacción con la Ninhidrina
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Solución de Ninhidrina al 0.1%

D. Reacción de Millón, Una Prueba Para la Tirosina
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Reactivo de Millón
E. Reacción Xantoproteica, Una Prueba Para Anillos Aromáticos
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Acido nítrico concentrado
Hidróxido de amonio concentrado

F. Reacción de Hopkins-Cole, Una Prueba Para el Triptófano
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Reactivo de Hopkins-Cole
Acido sulfúrico concentrado
G. Reacción de Acree-Rosenheim, Prueba Para el Triptófano
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Solución diluida de formaldehido
Acido sulfúrico concentrado

H. Reacción Para el Grupo Tiónico, Prueba Para la Cisterna
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Solución de hidróxido de sodio 6 N
Solución de acetato de plomo al 10%

I. Reacción de Molisch, Prueba Para Glúcidos
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de gelatina al 2%
Solución de caseína al 2%
Solución alcohólica de ∞ naftol al 5%
Acido sulfúrico concentrado




LABORATORIO #5
Precipitación y desnaturalización de las
Proteínas
Objetivos:
1. Estudiar el efecto de diversos agentes físicos y químicos sobre las propiedades de las proteínas.
2. Reconocer cuales son los fenómenos asociados con la precipitación y la desnaturalización de las proteínas.
3. Relacionar la precipitación y desnaturalización de las proteínas por agentes físicos y químicos como procedimiento médicos y métodos de esterilización.
Materiales
a. Precipitación por acción de sales metálicas
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de cloruro de mercurio al 5%
Solución de acetato de plomo al 5%
Solución de nitrato de plata al 5%

b. Precipitación por acción de reactivos alcaloides
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de acido tánico al 10%
Solución saturada de acido pícrico

c. Precipitación por saladura
Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución saturada de cloruro de sodio
Solución saturada de sulfato de amonio

d. Precipitación por el alcohol
Solución de ovoalbúmina al 2%
Alcohol etílico al 95%

e. Coagulación por el calor
Solución de ovoalbúmina al 2%

f. Reacción de Heller, prueba con el acido nítrico
Solución de ovoalbúmina al 2%
Acido nítrico concentrado

Solución de ovoalbúmina al 2%
Solución de cloruro de mercurio al 5%
Solución de acetato de plomo al 5%
Solución de nitrato de plata al 5%
Solución de acido tánico al 10%
Solución saturada de acido pícrico
Solución saturada de cloruro de sodio
Solución saturada de sulfato de amonio
Solución saturada de cloruro de sodio
Solución saturada de sulfato de amonio
Alcohol etílico al 95%
Acido nítrico concentrado




Experimento N˚6
Las Enzimas


Objetivos:

Reconocer la naturaleza proteica de las enzimas.
Determinar la especificidad de una enzima por un sustrato específico.
Estudiar la influencia de algunos de los factores que afectan la actividad enzimática.

Reactivos:
Ø Preparación de un extracto crudo de ureasa:
§ Semillas de zapallo
§ Licuadora
§ Solución de NaOH al 15%
§ Solución de sulfato cúprico al 1%

Ø Especificidad de la ureasa:
§ Solución de urea 1.0 M
§ Solución de acetamida 1.0 M
§ Extracto de ureas proveniente de la prueba A
§ Solución de rojo de fenol. Rango de pH 6.4 – 8.2 (amarillo-rojo)

Ø Efecto de la concentración de la enzima sobre la velocidad de la reacción:
§ Solución de urea 1.0 M
§ Extracto de ureas proveniente de la prueba A
§ Solución de rojo de fenol. Rango de pH 6.4 – 8.2 (amarillo-rojo)

Ø Influencia de la temperatura sobre la actividad enzimática:
§ Solución de urea 1.0 M
§ Extracto de ureas proveniente de la prueba A
§ Solución de rojo de fenol. Rango de pH 6.4 – 8.2 (amarillo-rojo)

Ø Influencia del pH sobre la actividad de la ureasa:
§ Solución de urea 1.0 M
§ Extracto de ureas proveniente de la prueba A
§ Solución de HCl 0.1 M
§ Solución de NaOH 0.1 M
§ Solución de KHC8H4O4 0.1 M
§ Solución de KH2PO4 0.1 M
§ Soluciones amortiguadoras de:
· pH 4 = 50 ml KHC8H4O4 0.1 M + 0.1 ml de HCl 0.1 M
· pH 6 = 50 ml KH2PO4 0.1 M + 5.6 ml de NaOH 0.1 M
· pH 8 = 50 ml KH2PO4 0.1 M + 46.7 ml de NaOH 0.1 M
§ Solución de azul de timol: Rango de pH 1.2 – 2.8 (rojo-amarillo)
Rango de pH 8.0 – 9.6 (amarillo-azul)

Ø Influencia de los inhibidores sobre la actividad de la ureasa:
§ Solución de urea 1.0 M
§ Extracto de ureas proveniente de la prueba A
§ Solución de cloruro mercúrico 0.2 M
§ Solución de nitrato plumboso 0.2 M
§ Solución de rojo de fenol.


EXPERIMENTO 7
DETERMINACIÓN DE LA VITAMINA C EN ALGUNOS ALIMENTOS
OBJETIVOS:
1. Ensayar un método para determinar el contenido de vitamina C en algunos alimentos.
2. Estudiar el efecto del proceso de cocción sobre el contenido de vitamina C en los alimentos.
MATERIALES Y REACTIVOS:
a. Legumbres frescas (verduras): repollo, espinacas, ají dulce, berro, perejil, etc.
b. Disolución de ácido oxálico al 1%.
c. Lana de vidrio o algodón.
d. Disolución de 2,6- diclorofenolindofenol.
e. Ácido acético glacial.
f. Ácido ascórbico puro.










Experimento #9
La digestión
Objetivos
· Comprobarla capacidad de hidrólisis de algunas de las enzimas que participan en la digestión.
· Determinar cuáles son las condiciones óptimas para la actividad catalítica de algunas de las enzimas digestivas.
· Familiarizar al estudiante con las funciones y la importancia de los órganos y glándulas que participan en el proceso de la digestión.
Materiales:
A-Influencia de la temperatura y del pH sobre la actividad de la amilasa salivar.
1- Reactivos
· Solución de almidón al 1%
· Solución de Na2HPO4 1/15 M
· Solución de KH2PO4 1/15M
· SOLUCIONES AMORTIGUADORAS DE FOSFATOS
· PH 5.2=2.0ML DE Na2HPO4 1/15M +98.0 Ml de KH2PO4 1/15M
· PH6.6=37.5ML DE Na2HPO4 1/15M +62.5ML DE KH2PO4 1/15M
· PH 8.0=94.5ML DE Na2HPO4 1/15M +5.5ML DE KH2PO4 1/15M
PARAFINA
SALIVA DILUIDA
SOLUCIÓN DE YODO 0.01M
SOLUCIÓN DE ACIDO ACÉTICO 1.0
B-Estimación de la amilasa salival
2- A-SOLUCIÓN DE ALMIDÓN AL 1%
3- B-SOLUCIÓN DE CLORURO DE SODIO AL 1%
4- C- SOLUCIÓN DE YODO 0.01M
5- D-SALIVA DILUIDA (1:10)
C.-Influencia de la temperatura y del pH sobre la actividad de la pepsina
1- Solución de pepsina al 0.4%
2- Solución de ácido clorhídrico 0.2 M
3- Solución amortiguadora de fosfato 1/15 M de Ph 5.2 y PH 6.6
4- Fibrina teñida con índigo carmín
D- determinación de la acides gástrica
Jugo gástrico artificial
1- Reactivo de topfer
2- Solución valorada de hidróxido de sodio 0.1 N
3- Solución de fenolftaleína al1%
E efecto del PH sobre la actividad de la tripsina
1- Solución de tripsina comercial al 0.25%
2- Soluciones amortiguadoras de fosfato 1/15 M de PH 5.2 6.6 y8.0
3- Polvo de cuero teñido con rojo Congo
Amilasa pancreática al
Solución pancreática 0.5% en Na2 CO3 0.05M
Solución de almidón 1%
Solución de yodo 0.01
Reactivo de benedict
f-Lipasa pancreática
1- Solución pancreática 0.5% en Na2 CO3 0.05M
2- Emulsión de grasas
3- Bilis neutralizada
4- Alcohol etílico al 95% neutralizado
5- Solución de fenolftaleína al 1%
6- Solución de hidróxido de sodio 0.02 N
Efecto de l bilis sobre

Experimento #10
La sangre
Objetivos
· Identificar algunos de los constituyentes orgánicos e inorgánicos de la sangre
· Ensayar un método para separar y fraccionar las proteínas plasmáticas
· Comprobar la naturaleza proteica de las fracciones separadas
· Realizar ensayos que permitan reconocer algunas de las reacciones de la hemoglobina

Reactivos
a-preparación de u filtrado de sangre libre de proteínas
· sangre oxalatada
· solución de tugstato de sodio al 10%
· solución de ácido sulfúrico 0.7N
· solución de ácido sulfúrico al 10%
B-Identificación de algunos constituyentes inorgánicos de la sangre
· solución de acido clorhídrico 1.0M
· SOLUCIÓN DE FERROCIANURO DE POTASIO 0.2M
· Solución de ácido nítrico 0.1M
· Solución de nitrato de plata 0.1 M
· Solución de molibdato de amonio
Reacciones para algunos constituyentes orgánicos de la sangre
· Solución de ureasa o extracto acuosos de semillas de zapallo
· Solución saturada de ácido pícrico
· Solución de hidróxido de sodio al 10%
· Reactivo de benedict
· Solución saturada de carbonato de sodio
· Solución de ácido fosfotúctanico
· Suero humano diluido
· Mezcla de ácido y anhídrido acético
· Ácido sulfúrico concentrado
· Mezcla productora de color
Índice ictérico
· Plasma sanguíneo
· Solución de dicromato de potasio al 0.01%
Separación de las proteínas plasmáticas
· Plasma sanguíneo
· Solución de sulfato de amonio
· Solución de hidróxido de sodio al 10%
· Solución de sulfato cúprico al 0.5%
Coagulación de la sangre
· Sangre oxalatada
· Solución de cloruro de calcio al 5%
Hemoglobina reducida y oxihemoglobina
· Sangre oxalatada
· Solución de ditionato de sodio al 1%
Carboxihemoglobina
· Sangre oxalatada
· Ácido sulfúrico concentrado
· Ferrocianuro de potasio
· Generador de monóxido de carbono
BIBLIOGRAFÍA:
WADE, JR., L.G. “QUÍMICA ORGÁNICA”. Edición. Prentice Hall.

MORRISON Y BOYD. “QUÍMICA ORGÁNICA”. Edición. Addison Wesley
Iberoamericana.

MORRISON Y BOYD. “QUÍMICA ORGÁNICA PROBLEMAS RESUELTOS”. Edición.
Addison – Wesley Iberoamericana.

BARUM, S. “INTRODUCCIÓN A LA QUÍMICA ORGÁNICA Y BIOLOGÍA”. Edición
C.E.C.S.A.

FESSENDEM R. Y FESSENDEM J. “QUÍMICA ORGÁNICA”. Ed. Grupo Editorial
Iberoamericana.

NECKERS D. Y DOYLE M. “QUÍMICA ORGÁNICA CONTINENTAL”. S.A.

ROSKOSKI, ROBERT, Jr. “BIOQUÍMICA”, 3ra Edición. Editorial Reverte Barcelona 1988
STRYER, LUBERT. BIOQUÍMICA. 3ra Edición. Editorial Reverte Barcelona 1988



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